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QX200微滴式数字PCR大致应用
发布时间:2017-03-03        浏览次数:8949次

QX200微滴式数字PCR大致应用

一.基因表达量差异研究

 

检测时完全不依赖传统的Ct值即可实现真正意义上的绝对定量,从而提供了比实时荧光定量PCR更精确的基因差异表达研究,尤其对于那些靶基因表达差异微小的情况,如microRNA的表达分析,等位基因的不平衡表达,单细胞基因表达分析等等。

 

二.表观遗传学及基因组学的研究

 

1. 拷贝数变异(CNV)研究:微滴化的样品处理及检测,这种绕过Ct值的计算方法而直接获取目标基因的绝对拷贝数,为拷贝数变异的研究提供了绝对的检测精度。是其他诸如二代测序、芯片杂交等平台无法达到的。

 

2. 甲基化含量鉴定:作为表观遗传学研究中重要的一个研究方向--甲基化程度分析,现阶段有不同的方法或技术来进行研究:如传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序统计法、抗体检测法、定量PCR检测法等。这些方法皆因方法学的问题而不能获得精确的定量,而微滴式数字PCR系统通过对样品的微滴化处理及目标因子的绝对拷贝数定量,为甲基化程度的精确定量检测提供了一种全新的技术。

 

3. 低丰度及稀有序列的精确定量:目前对于低丰度目标序列的检测,定量PCR、杂交等方法都因受到背景DNA的干扰,使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下,其重复性就不是很高),而微滴式数字PCR系统通过核心的微滴化处理,使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来,从而提高了检测的灵敏度及精确性。具体应用如在体液(血液、尿液、粪便等)中对肿瘤核酸标记物的检测。

 

三.医学检测中的优势

 

1. 无创伤的产前诊断技术:无创伤的产前诊断,21染色体为3倍体的唐氏综合征(现有人使用二代测序进行深度测序)、已知父母基因型的胎儿地贫检测或已知父母基因型的其它核酸病检测(跟孟德尔遗传规律相关遗传)。因为标本来源于目前的血液,而待检测的胎儿DNA受到母体DNA的干扰,影响了检测的准确性。而QX200检测系统独特的微滴化技术完全可以代替刚刚兴起的二代测序法来进行的无创伤产前诊断,从而提高工作效率及节约成本。

 

2. 个性化基因治疗的应用:我们常用的检测标本常常是如血液、粪便、尿液等体液来源,对于这些标本中的DNA,其有两种来源途径:正常脱落体细胞的DNA和病变脱落细胞的DNA,而正常脱落体细胞的DNA量是远大于病变组织脱落细胞的DNA量的,为此通过微滴化处理就能在每个微滴中有效的减少体细胞DNA的干扰,实现肿瘤标记物的有效检测,可应用于个性化基因治疗(如肺癌等相关的EGFRKARSBRAF基因的SNP突变检测从而来指导用药方案的选择与调整)